Informazioni tecniche sull’ISAC®

L’ISAC® è un'applicazione diagnostica in vitro (IVD) all'avanguardia per l'analisi semiquantitativa delle immunoglobuline IgE presenti nel siero umano. In questo caso, sono stati combinati i vantaggi della tecnologia biochip con la diagnosi immunologica. L’ISAC inoltre è il primo test diagnostico basato sull’utilizzo di biochip ad essere stato autorizzato nell’UE.

L'ISAC® consiste in un supporto solido in vetro con quattro siti di reazione (7x7 mm). Ogni sito di reazione è circondato da una maschera protettiva ed idrofoba di Teflon, che impedisce la contaminazione di liquidi fra i diversi siti di reazione. La superficie di vetro nei quattro siti è studiata, dal punto di vista chimico, in modo tale da permettere un fissaggio ottimale delle proteine che scatenano le allergie senza che per questo venga minimamente alterata la loro funzionalità biologica. Ogni sito di reazione può contenere fino a 400 diversi componenti (=allergeni).

A differenza dei sistemi tradizionali, l'ISAC® non utilizza alcun estratto allergenico, ma esclusivamente allergeni nativi altamente purificati o ricombinanti che hanno il vantaggio di permettere una migliore standardizzazione. Il vantaggio di usare una diagnosi in-vivo e in-vitro, basata su allergeni ricombinanti è documentata in una lista di  pubblicazioni (Si prega di cliccare qui per avere più dettagli sulla diagnostica basata sull’utilizzo di singoli componenti). Ogni allergene viene applicato tre volte (=in triplicato) in ogni sito di reazione.

In questo modo il test offre un’eccellente sicurezza nei risultati attraverso la garanzia dell’analisi statistica ed un eccezionale aumento dell’affidabilità della diagnosi.

Per il test ISAC sono applicati su ciascun sito di reazione del Biochip ISAC® 20 μl di siero del paziente. Se nel siero si trovano anticorpi IgE specifici contro uno o più allergeni, questi si legano solo al sito dove si trovano i suddetti allergeni. Il legame degli anticorpi IgE specifici agli allergeni viene rilevato atttraverso l’utilizzo di anticorpi fluoresceinati, diretti contro le IgE umane, che vengono eccitati attraverso l’utilizzo di un laser a determinate lunghezze d’onda, in modo da poter essere misurati con uno spettrofotometro. Questo fenomeno viene ripreso con una scansione e procede in modo totalmente automatico per ogni sito di reazione fino al completamento del lavoro. L’analisi finale viene eseguita con l’ausilio di software e comunque è del tutto automatizzata.

Per l’interpretazione dell’intensità della fluorescenza, ogni chip viene calibrato con un siero di controllo titolato per IgE conosciute e specifiche. In questo modo, viene garantita una definizione semiquantitativa del titolo delle IgE specifiche di tutti i campioni testati. L’operazione viene qualificata come calibrazione eterologa.

L’incubazione con il siero dura 2 ore, la fluoresceinazione 1 ora. Durante e prima di queste operazioni i biochip vengono lavati. La durata complessiva del test è di circa 5 ore. Una persona può condurre circa 100 test al giorno senza un’ulteriore automatizzazione, il che significa circa 8000 risultati per operatore.

I risultati dell'analisi ISAC® sono processati dal computer. Il software, sviluppato specificamente a questo scopo, determina la posizione del segnale di fluorescenza relativo all'allergene sulla rispettiva posizione. Il software provvede a fornire una curva di calibrazione, sulla base di un siero di calibrazione, contenente concentrazioni conosciute di IgE specifiche, che permette di normalizzare i valori di fluorescenza del segnale (kUA/L). Infine, i risultati vengono interpretati sottoforma di classi-ISAC (assente-basso-medio-alto), che vengono espresse anche nelle corrispondenti classi RAST.

Per la produzione dei test ISAC® vengono utilizzati esclusivamente allergeni ricombinanti o naturali altamente purificati. Ciò rende possibile, per la prima volta, un sensibile miglioramento della standardizzazione della diagnosi in vitro. Al momento sono disponibili nella lista del test ISAC CRD 103 allergeni (lista di allergeni), che coprono un ampio spettro di allergie. Fra le altre, possono essere testate allergie a polline di erbe ed alberi, peli di animali, ad alimenti, a veleni di insetto e a muffe. La linea di prodotti CRD si concentra sui principali allergeni che sono causa delle rispettive allergie. Per la selezione degli allergeni chiave, VBC-GENOMICS si basa sul parere di esperti di allergologia.

Per l’esecuzione dell’analisi (Manuale del prodotto ISAC) è necessario un laboratorio con un equipaggiamento standard che viene provvisto ai nostri partners. Per la scansione dei biochip ISAC è necessario il cosiddetto scanner di biochip/ lettore di biochip. In molte cliniche e grandi laboratori, tale strumento viene utilizzato anche per altre analisi, come ad esempio, i microarray di DNA. L’ISAC è stato sviluppato ed autorizzato per essere usato con strumenti della compagnia CapitalBio (CapitalBio), pertanto raccomandiamo fra tutti gli strumenti, quelli della serie LuxScan10K. Possono, comunque, essere utilizzati anche altri scanner attualmente in commercio. Per chiarimenti, si prega di contattare il nostro servizio clienti, sezione tecnica.

In INTERNET si trova una straordinaria collezione di informazioni sul tema delle allergie. Nella nostra sezione di link, si trovano molti rimandi ad altre pagine. In particolare, per imparare di più sugli allergeni, raccomandiamo sia all’esperto sia al profano interessato, la pagina www.allergome.org.